PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE DIFERENTES FORMAS MUTANTES DE LA CITOTOXINA ALFA-SARCINA.

Autor: LACADENA GARCIA GALLO FRANCISCO JAVIER
Año: 1996
Universidad: COMPLUTENSE DE MADRID
Centro de realización: DEPARTAMENTO: BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR I PROGRAMA DE DOCTORADO: BIOQUIMICA
Centro de lectura: BIOLOGIA
Director: MARTINEZ DEL POZO ALVARO
Tribunal: GAVILANES FRANCO JOSE GREGORIO , OÑADERRA SANCHEZ MERCEDES , BARBERO ESTEBAN JOSE LUIS , GARCIA LOPEZ JOSE LUIS , VAZQUEZ ESTEVEZ COVADONGA
Resumen de la tesis

LA ALFA-SARCINA ES UNA PROTEINA PRODUCIDA POR EL HONGO ASPERGILLUS GIGANTEUS MDH 18894, PERTENECIENTE A UN GRUPO DE RIBOTOXINAS FUNGICAS QUE SE CARACTERIZAN POR SU CARACTER CITOTOXICO, DEBIDO A SU ACTIVIDAD RIBONUCLEOLITICA. EL CDNA DE ESTA PROTEINA SE HA CLONADO EN DIFERENTES SISTEMAS DE EXPRESION PERMITIENDO LA PURIFICACION DE ALFA-SARCINA RECOMBINANTE, ESTRUCTURAL Y ENZIMATICAMENTE INDISTINGUIBLE DE LA FUNGICA. ESTE SISTEMA DE EXPRESION HA PERMITIDO LA PRODUCCION DE GRANDES CANTIDADES DE FORMAS MARCADAS UNIFORME Y SELECTIVAMENTE (TYR Y PHE) CON N15 Y C13, ASPECTO ESTE IMPRESCINDIBLE PARA LA RESOLUCION DE LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA PROTEINA. SE HAN PURIFICADO Y CARACTERIZADO DIFERENTES FORMAS MUTANTES DE LA ALFA-SARCINA, EN RESIDUOS PERTENECIENTES AL CENTRO ACTIVO DE LA PROTEINA. ESTO HA PODIDO CONFIRMAR LA PARTICIPACION DE LAS HIS50 Y 137 EN EL MANTENIMIENTO DE LA ACTIVIDAD RIBONUCLEOLITICA DE ESTA PROTEINA INACTIVANTE DE RIBOSOMAS. POR OTRO LADO, MUTACIONES EN LA CYS76 Y 132 IMPLICAN UNA MAYOR DIFICULTAD EN SU PURIFICACION Y SU CARACTERIZACION SUGIERE EL MANTENIMIENTO DE SU CAPACIDAD PARA INTERACCIONAR CON BICAPAS LIPIDICAS.
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