NUEVAS ESTRATEGIAS EN LA PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE LOS CONCENTRADOS DE PLAQUETAS

Autor: PEREZ CEBALLOS ELENA
Año: 2003
Universidad: MURCIA
Centro de realización: UNIVERSIDAD DE MURCIA
Centro de lectura: CENTRO REGIONAL DE HEMODONACION
Director: RIVERA POZO JOSE
Tribunal: VICENTE GARCIA VICENTE , GONZALEZ ROS JOSE MANUEL , BARBOLLA GARCIA LUZ , CORRAL ALONSO MERCEDES , VALLEJO LLAMAS JUAN CARLOS
Resumen de la tesis

Introducción: La transfusión de plaquetas es una herramienta esencial en la medicina moderna, por lo que existe una demanda creciente de concentrados de plaquetas (CPs). Actualmente los CPs se conservan a 22 ºC durante un máximo de 5 días, ya que un almacenamiento más largo dispara el riesgo de contaminación bacteriana. Esta corta vida media ocasiona problemas logísticos, y provoca la pérdida por caducidad de muchos CPs (20-40%). Una estrategia sencilla para prolongar la duración de los CPs sin aumentar el riesgo de contaminación, sería el almacenamiento refrigerado, pues el frío inhibe el crecimiento de las bacterias. Sin embargo, el frío activa y lesiona las plaquetas. Nuestros estudios preliminares sugieren que los efectos negativos del frío disminuyen con inhibidores de la activación plaquetaria. Al margen de las distintas estrategias de almacenamiento de CPs, un segundo aspecto de actual controversia en el campo de la transfusión es el tema de la leucorreducción de los componentes sanguíneos. Recientemente, se ha debatido la utilidad de implantar la filtración universal de los productos sanguíneos, y en un principio una de las razones argumentada en favor de tal medida ha sido la potencial transmisión transfusional vehiculizada por los leucocitos de la nueva variante de enfermedad de Creutzfeld- Jakob (nvECJ). A pesar de las controversias aún no resueltas sobre este tema, es un hecho que la leucorreducción universal pre-almacenamiento de todos los componentes sanguíneos, está siendo adoptada progresivamente a nivel internacional como un nuevo estándar en la producción de los mismos. La filtración pre-almacenamiento se realiza normalmente en los centros de transfusión durante las primeras 72 horas tras la donación, obteniéndose productos sanguíneos leucorreducidos que en general se consideran de mayor calidad que aquellos filtrados en la cabecera del enfermo, ya que se previene la acumulación de las citoquinas liberadas por los leucocitos durante el periodo de almacenamiento. Además, la leucorreducción pre-almacenamiento parece asociarse a una menor activación plaquetaria y a una mayor recuperación de plaquetas in vivo, que la filtración a la cabecera del enfermo.La leucorreducción por filtración de la sangre total (ST) antes del fraccionamiento es un proceso que, hasta ahora, limita la producción de componentes sanguíneos y en particular la de los concentrados de plaquetas (CPs), puesto que los filtros de ST disponibles retienen leucocitos y plaquetas, impidiendo el uso de las unidades filtradas para obtener CPs. Objetivos: 1. En relación con el almacenamiento refrigerado de CPs 1.1 Evaluar la eficacia individual de cada uno de los constituyentes de la formulación original de ThromboSolTM, para preservar el contenido en plaquetas de CPs almacenados bajo refrigeración y reposo, durante un periodo máximo de quince días. Para aquellos más eficaces, realizar un análisis de la relación entre dosis y efecto. 1.2 A partir del análisis anterior, diseñar una nueva combinación simple con estos efectores que aporte la menor carga farmacológica posible, y evaluar in vitro el efecto de este tratamiento sobre las propiedades estructurales, bioquímicas, y funcionales de las plaquetas de CPs almacenadas a 4 ºC. 2 En relación con la obtención sencilla de CPs leucorreducidos 2.1 Analizar la operatividad y eficacia de un nuevo sistema de bolsa de sangre total que incorpora "en línea" un único filtro diseñado para retener selectivamente leucocitos pero no plaquetas, Imuflex WB-SP de la compañía Terumo Corporation. Para ello, el sistema de bolsa cuádruple se empleará para el fraccionamiento de las unidades de sangre bajo la modalidad de PRP, que es la usada en nuestro centro. 2.2 Investigar en detalle el comportamiento in vitro de los CPs resultantes del fraccionamiento, método de PRP, de las unidades de sangre leucorreducidas con este sistema, en comparación con el de CPs estándar obtenidos en paralelo. Material y Métodos y Resultados: Objetivo 1: Evaluación de concentrados de plaquetas refrigerados, tratados con dosis bajas de moduladores de segundos mensajeros. Se valoraron CPs tratados con diferentes combinaciones de moduladores de segundos mensajeros fueron analizados en los días 5, 10, y 15 del almacenamiento a 4ºC, y los resultados se compararon con los correspondientes a CPs almacenados en idénticas condiciones tratados con ThromboSolTM (LifeCell Corp., Woodlands, TX), una combinación previamente descrita de seis inhibidores plaquetarios que protege a las células del daño inducido por el frío. Los parámetros analizados en el estudio comparativo fueron los siguientes: recuento plaquetario, parámetros bioquímicos (glucosa, pH, bicarbonato, lactato), lisis celular (LDH), glicoproteínas de membrana, agregación plaquetaria, unión al fibrinógeno, y respuesta al choque osmótico. Identificamos la combinación de nitroprusiato sódico y amiloride, a la mitad de la dosis contenida en el ThromboSol, como un tratamiento de eficacia similar al ThromboSol en: i) la prevención de la agregación plaquetaria espontánea y la pérdida de plaquetas durante el almacenamiento refrigerado prolongado (78% y 80% de recuperación de plaquetas, respectivamente, en el día 15 del almacenamiento refrigerado); ii) la conservación de la glicoproteína Iba en la superficie de las plaquetas (intensidades de fluorescencias medias de este antígeno un 11% y un 12% superiores en las plaquetas tratadas con Amiloride + nitroprusiato sódico y ThromboSol, en comparación con las CPs no tratados); iii) la evolución de los parámetros morfológicos, bioquímicos, y de integridad celular (13% y 11% de reducción en el nivel de LDH en los CPs tratados con Amiloride + nitroprusiato y ThromboSol, respectivamente). Objetivo 2: Valoración de un nuevo filtro de sangre total que permite la obtención de concentrados de plaquetas leucorreducidos, mediante el método del plasma rico en plaquetas Para analizar la retención del filtro, obtuvimos sangre de donantes habituales usando un sistema de bolsa cuádruple con un filtro integrado en línea (ImuflexÒ WB-SP, Terumo; n=25), o mediante un sistema estándar de bolsa triple (n=30). Para valorar las características in vitro de los CPs, se mezclaron por parejas 26 unidades isogrupo de ST en 13 bolsas, distribuyéndose la mitad de cada volumen resultante en 13 unidades de ST que fueron sometidas a leucorreducción mediante filtración en línea, y en 13 unidades que no fueron leucorreducidas. En todos los casos, la ST fue fraccionada mediante el método PRP, en concentrados de hematíes (CHs), CPs, y plasma, y se comparó la funcionalidad plaquetaria en los CPs leucorreducidos y no leucorreducidos resultantes.El proceso de filtración permitió obtener CHs y CPs leucorreducidos que cumplen los requerimientos europeos y de la AABB. El promedio del tiempo de filtración en línea fue de 30 minutos, el filtro retuvo unos 45 mL de ST, no produciéndose pérdidas adicionales de hematíes durante el proceso de fraccionamiento. Durante el almacenamiento, las características in vitro de los CPs filtrados fue similar a las unidades no filtradas apareadas. Conclusiones: 1. A efectos de prevención de la agregación plaquetaria espontánea y/o de la disminución significativa en la concentración de plaquetas que se observa en CPs estándar cuando se almacenan de manera prolongada bajo refrigeración, el tratamiento de estos hemoderivados únicamente con nitroprusiato sódico y amiloride a dosis bajas, muestra una eficacia comparable a la del tratamiento con la combinación de seis moduladores de segundos mensajeros conocida como ThromboSolTM. 2. De manera comparable a lo observado con ThromboSolTM, el tratamiento de CPs refrigerados con nitroprusiato sódico y amiloride a dosis reducida, ayuda a preservar el nivel de glicoproteína Iba en la superficie de las plaquetas, parámetros de respuesta funcional in vitro, y la integridad celular, en comparación con plaquetas refrigerados en ausencia de estos inhibidores. 3. En la búsqueda de estrategias para el potencial almacenamiento prolongado de CPs bajo refrigeración, nuestra propuesta de tratamiento con nitroprusiato sódico y amiloride a bajas dosis, parece una opción preferible al ThromboSol, ya que reduce la carga farmacológica en los CPs, y ofrece similar eficacia para preservar la concentración celular y las propiedades in vitro de las plaquetas. 4. Aunque in vitro parece que las plaquetas refrigeradas con nitroprusiato sódico y amiloride conservan razonablemente su funcionalidad, es obvio que el potencial uso clínico estos productos plaquetarios está condicionado a la constatación en futuros estudios in vivo, de la capacidad de estas plaquetas refrigeradas para sobrevivir en la circulación sanguínea durante un periodo razonable, y para ejercer una acción hemostática suficiente. 5. Ratificamos que el nuevo modelo de filtro de sangre total de poliuretano Imuflex WB-SP, es eficaz para reducir en 4 logaritmos el contenido en leucocitos en unidades de sangre total estándar, mediante una única filtración por gravedad que se realiza en unos 30 minutos. 6. Bajo nuestra condiciones experimentales, la filtración única de unidades de sangre total a través del filtro Imuflex WB-SP, permite una recuperación media del 90% de los hematíes y del 80% de las plaquetas originales. 7. Con el filtro Imuflex WB-SP incorporado en línea en un sistema de bolsa cuádruple, es posible la obtención fácil de unidades de sangre total leucorreducida que después pueden ser fraccionadas rutinariamente por el método de PRP, para obtener plasma fresco, y unidades de CHs, y CPs leucorreducidos, que cumplen los estándares de contenido celular establecidos tanto por la Unión Europea como por la AABB. 8. Bajo las condiciones de almacenamiento rutinario de los bancos de sangre, los CPs leucorreducidos obtenidos por el método del PRP a partir de unidades de sangre total filtradas con Imuflex WB-SP, muestran características de calidad in vitro comparables a las de CPs convencionales. 9. De acuerdo con los datos de nuestra investigación, el filtro Imuflex WB-SP incorporado en línea en un sistema de bolsa cuádruple, podría ser una alternativa eficiente y sencilla, para la obtención selectiva o universal de componentes sanguíneos leucorreducidos en los centros de transfusión.
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