IDENTIFICACIÓN DE NUEVOS GENES HUMANOS EXPRESADOS EN PLACENTA MEDIANTE LA TÉCNICA DE REPRESENTACIÓN DIFERENCIAL DE RNA MENSAJEROS (DD RT-PCR)

Autor: GARCÍA LIÉVANA JOB
Año: 2003
Universidad: AUTONOMA DE MADRID
Centro de realización: CENTRO DE BIOLOGÍA MOLECULAR "SEVERO OCHOA"
Centro de lectura: CIENCIAS
Director: CASTRILLO DÍEZ JOSE LUIS
Tribunal: FERNÁNDEZ PIQUERAS JOSÉ , SIMÓN VALLÉS CARLOS , ESBRIT ARGÜELLES PEDRO , GARCÍA RUÍZ PREDESTINACIÓN , TALAVERA DÍAZ ANTONIO
Resumen de la tesis

En esta Tesis, la técnica de Representación Diferencial de RNA menajeros o Differential Display RT-PCR (DD RT-PCR) se llevó a cabo para identificar genes específicamente expresados entre líneas celulares derivadas de cariocarinomas humanas (JEG-3, JAR and BeWo) y células de placenta normal a término. Pocas diferencias fueron detectadas entre los perfiles de expresión de las tres líneas de coriocarcinomas y la mayor parte de los genes expresados diferencialmente, fueron detectados en placenta normal a término. Un total de 36 fragmentos de cDNA fueron aislados y analizados mediante comparación con las bases de datos de secuencias disponibles. De estos fragmentos, 19 secuencias correspondieron a regiones en el genoma humano que codifican para genes potencialmente nuevos. La expresión diferencial de 3 nuevos genes humanos seleccionados, en las regiones cromosómicas 16q12,9q32 y 6q22, fue confirmada mediante RT-PCR. Las otras 17 secuencias mostraron una alta similitud con genes humanos ya identificados (como PSG3, FN1, PAI-2). Interesantes, las funciones de cinco genes y sus productos (genes IK, TRA-1, HERPUD1, UBA2 y TRAP240) no han sido caracterizados en tejidos placentario. Además, nuevas isoformas de RNAs mensajeros cortados y empalmados de manera alternativa fueron detectados para los genes IK, TRAP240 y PLAC3. La expresión diferencial del gen PAI-2, un inhibidor de proteasas de serina, entre las líneas de cariocarcinoma fue también confirmada. Un mayor análisis experimental de uno de los posibles genes nuevos, permitió la identificación de un nuevo cDNA en la cadena antisentido en la región cormosómica 9q32. Reacciones de 5' y 3' RACE se llevaron a cabo y una secuencia parcial de 1.2 kb se estableció para este nuevo RNA mensajero. Este nuevo gene no contiene intrones en su secuencia. La secuencia de la proteína (103 aminoácidos) generada a partir del marco de lectura abierto no mostró similitud con ninguna proteína conocida o con dominios conservados en otras secuencias proteína conocida o con dominios conservados en otras secuencias proteicas. Mostró alrededor de un 21% de similitud con la proteínas RAG-1 del pez cebra (Zebra fish). Este nuevo gene fue designado como RLPLAC (de RAG1-like gene isolate from placenta). En reacciones de RT-PCR utlizando RNA de mútliples tejidos humanos y oligonucleótidos específicos diseñados, la expresión ubicua de este nuevo transcrito fue determinada. Una proteína de fusión con la proteína en el retículo endoplasmático. La función de este nuevo gene en la placenta y otros tejidos permanece por ser determinada. En general, los genes identificados en este trabajo por DD RT-PCR serán de interés para una mejor comprensión de la biología del trofoblasto y de la formación de tumores placentarios (coriocarcinomas).
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