ESTUDIO ESTRUCTURAL Y DISEÑO DE PEPTIDOS BIOACTIVOS.

Autor: ESTEVE MOYA VICENT
Año: 2000
Universidad: VALENCIA
Centro de realización: FACULTAD DE QUIMICAS
Centro de lectura: QUIMICA
Director: CELDA MUÑOZ BERNARDO
Tribunal: MORATAL MASCARELL JOSE MARIA , JIMENEZ LOPEZ M.ANGELES , PONS VALLES MIQUEL , FERRER MONTIEL ANTONIO , SALGADO BENITO JESUS
Resumen de la tesis

Los estudios iniciales de CD y el analisis de los espectros obtenidos de experimentos de RMN utilizando DMSO como disolventes indicaban que los peptidos de secuencia Ac-L WRIL W-NH2 y Ac-1wrilw-NH2 poseian cierta tendencia a formar helices alfa. En el primer caso helices alfa a derechas y en el segundo hélices alfa a izquierdas. Los dos hexapeptidos resultaron activos e la inhibicion de calmoldulina. Los estudios de busqueda conformacional realizados siempre llevaron a helices alfa como las estructuras mas estables para estos hexapeptidos. En disolucion acuosa se observa un aumento de la poblacion de conformaciones en helice alfa. Los espectros de CD, los desplazamientos quimicos, constantes de acoplamiento y NOEs de medio alcance, indican que en presencia de un 30% de TFE la estructura en helice alfa es predominante. Los datos de RMN se utilizaron como restricciones para generar, utilizando la tecnica de templado simulando, una familia de estructuras. El analisis de posibles interacciones intramoleculares en esta familia de estructuras muestra que son posibles numerosos puestes de hidrogeno con las cadenas laterales y grupos de "capping". Asi mismo, las cadenas laterales de los residuos hidrofobos(leucinas e isoleucina) se encuentran proximas formando un pequeño nucleo hidrofobo. Las cadenas laterales de los triptófanos pueden interaccionar con las zonas hidrofóbicas o con el grupo amino cargado de la cadena lateral de la arginina (interaccion del tipo cation-orbital r), aunque no se ha encontrado una evidencia experimental clara al respecto. Tambien se han contrastado los determinantes de la estabilizacion estructural estudiando una familia de analogos con algunas sustituciones en los residuos originales. Todos ellos fueron estudiados por RMN y CD. Entre ellos es de destacar el importante papel de acetilo N-terminal como "iniciador" de la helice. Su eliminacion comportaba la perdida de cualquier indicio de estructura. Todas las sustituciones por glicina provocan la disminucion o perdida de estructura, ya que este residuo introduce un grado mayor de flexibilidad en la cadena. Proteina de movimiento del virus CarMV Los estudios de RMN sobre un péptido sintético correspondiente al dominio de union a RNA de la proteina p7 del CarMV muestran una conformacion desordenada en disolucion acuosa, aunque se manifiesta una pequeña tendencia a estructurarse como helice alfa en su extremo C-terminal que puede tener un significado funcional. La adicion de TFE provoca la induccion de estructura en helice alfa de la mayor parte del dominio. Cierta mutacion en el interior de la secuencia en que se sustituye uno de los residuos por prolina(conocido desestabilizador de hélice alfa) permite todavia la union al RNA de este peptido. El estudio por RMN de estos peptidos sustituidos muestra que la helice alfa podria arrancar de la prolina introducida. Es mas, la curvatura provocada por la prolina podria facilitar su union al RNA al tiempo que podria estabilizar el comienzo de la helice. Proteina diseñada de novo A partir de los péptidos con capacidad de formar un haz de hélices con actividad enzimatica, se seleccionaron los que habian sido optimizados utilizando las SCL. Se ha estudiado por RMN la capacidad de autoensmblaje de tres de ellos y se han comparado con el peptido original utilizado como plantilla. Los resultados muestran como solamente aquellos peptidos con un numero suficiente de posibles interacciones en el lado hidrofilo de haz de helices es capaz de mantener el complejo cuaternario deseado aun cuando comparten los mismos aminoacidos con potencialidad de formar el nucleo hidrofobo.
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