EFICACIA DE LA TERAPIA GÉNICA CON ADENOVIRUS DL118 EN UN MODELO EXPERIMENTAL DE MELANOMA UVEAL

Autor: ORDÓÑEZ GARCÍA JOSÉ LUIS
Año: 2002
Universidad: VALLADOLID
Centro de realización: IOBA - UNIVERSIDAD DE VALLADOLID
Centro de lectura: MEDICINA
Director: SAORNIL ÁLVAREZ M. ANTONIA
Tribunal: PASTOR JIMENO JOSÉ CARLOS , PROENÇA RUÍ , RAMÓN Y CAJAL SANTIAGO , GARCÍA ARUMÍ JOSÉ , CUEVAS ÁLVAREZ JUAN
Resumen de la tesis

INTRODUCCIÓN El melanoma uveal es el tumor intraocular maligno más frecuente en el adulto, siendo su incidencia de aproximadamente 6 nuevos casos anuales por millón de habitantes. Una de las características de la enfermedad que sólo presentan el 2,4% de los pacientes en el momento del diagnóstico es la aparición de metástasis principalmente en el hígado, para las que no existe tratamiento eficaz, situándose la mortalidad de los pacientes alrededor del 50% a los 10 años del diagnóstico. Para el estudio de la enfermedad se han desarrollado varios modelos experimentales, de ellos el realizado en conejos albinos inmunosuprimidos con Ciclosporina A (CsA) mediante el implante de líneas celulares de melanoma uveal humano es uno de los que mejor refleja el comportamiento de la enfermedad humana. Los tratamiento conservadores que actualmente se aplican frente al tumor primario han permitido el control local de la enfermedad entre un 80-90% de los pacientes pero no se ha conseguido mejorar la supervivencia de los pacientes. La terapia génica es desde hace más de dos décadas una herramienta terapéutica útil para los pacientes con diferentes grados de tumores. En la actualidad se estánllevando a cabo en pacientes con tumores de cabeza y cuello estudios clínicos de terapia génica en fase III con adenovirus de replicación selectiva (dl 1520) que tienen delecionado parcialmente el gen E1b y que expresan E1a. Un adenovirus serotipo 5 similar al anterior y que tiene delecionado la región E1b completa (dl118) ha demostrado en estudios in vitro e in vivo disminuir el crecimiento tumoral e impedir la formación de metástasis. El objetivo de este estudio ha sido determinar el efecto citopático de los adenovirus dl118 sobre diferentes líneas celulares de melanoma uveal humano y además estudiar el efecto antitumoral de la aplicación de estos adenovirus en un modelo e melanoma uveal en conejo albino inmunosuprimido con CsA. MATERIAL Y MÉTODO 1,- Se evaluó el efectocitopático in vitro de los adenovirus dl118 y wild type (Wt300) aplicados a dos diferentes concentraciones (20 pfu/cél y 100 pfu/cél) frente a diferentes líneas celulares de melanoma uveal humano (SP 6.5, 92-1, MKT-BR, OCM-1). 2,- Se estudio el efecto de la aplicación de adenovirus dl118 sobre la línea celular 92-1, infectando dicha línea previamente a ser implanta en la coroides conejos albinos. Para ello se establecieron dos grupos de animales (n=15). A los animales del grupo experimental (1) se les implantaron 1x10(6) células previamente infectadas por ads dl118 a una concentración de 20 pfu/célula durante 30 minutos. Al grupo control (2) se les implantaron células que fueron mantenidas en PBS durante 30 minutos. Los animales fueron seguidos durante 8 semanas. 3,- Se estudió el efecto de la administración sistémica de ads dl118. Se establecieron dos grupos de animales (n=14). Al grupo experimental (3) se les administró sistemáticamente 500 ul de ads dl118 a una concentración de 1x10(12) pfu/ml. A los animales del grupo control (4) se les administró de igual manera 500 ul de PBS. La duración de este estudio fue de 5 semanas. Al final de cada uno de los estudios realizados in vivo se procedió al sacrificio de los animales y al estudio histopatológico de los globos oculares y de los pulmones e hígados. Se realizaron también medidas histológicas de las áreas y diámetros tumorales de los globos oculares. En los hígados y pulmones se realizó tinción inmunohistoquímica con HMB-45 y Melan A para confirmar o descartar la presencia de metástasis. RESULTADOS 1,- A la concentración de 20 pfu/células, los adenovirus dl118 disminuyeron in vitro la viabilidad de las líneas celulares de melanoma uveal, observándose diferencias significativas respecto del control y el Wt300 en las líneas SP 6.5 y 92-1. A la concentración de 100 pfu/cél los adenovirus dl118 incrementaron la inhibición del crecimiento celular, permaneciendo vivas únicamente el 22% y el 40% respectivamente de las células de las dos líneas más sensibles. 2,- En el estudio de inhibición de la tumorogenicidad en el grupo (1) 10 animales desarrollaron tumores intraoculares frente a 11 en el grupo (2). Sin embargo los tumores en el grupo 1 fueron más pequeños y con menores signos de actividad observándose menor número de figuras mitóticas. Además sólo 2 animales presentaron tumores con extensiones extraesclerales frente al grupo 2 en el que 10 animales tuvieron tumores que se escaparon del confinamiento del globo ocular observándos diferencias estadísticamente significativas. Ninguno de los animales de los 4 grupos estudiados desarrolló metástasis en hígado ni en pulmón. CONCLUSIONES 1,- Los adenovirus dl118 inhiben in vitro la proliferación y crecimiento de las células de melanoma uveal, efecto dependiente de la concentración y de la línea celular. 2,- Los adenovirus dl118 disminuyen la proliferación y crecimiento de las células tumorales in vivo cuando dichos adenovirus son aplicados sobre las células de la línea celular 92-1 previamente a ser inyectadas en las coroides de conejos albinos inmunosuprimidos. 3,- La administración sistémica de adenovirus a las concentraciones empleadas no afectan al crecimiento y proliferación de los tumores. 4,- El efecto de las metástasis a distancia no ha podido ser evaluado ya que en ninguno de los grupos se ha conseguido objetivar su aparición. 5,- La administración de adenovirus con la pauta y dosis empleada no induce efectos secundarios ni influye en la supervivencia de los animales
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