DISEÑO Y CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL DE PEPTIDOTECAS CONFORMACIONALMENTE DEFINIDAS

Autor: PASTOR HERNÁNDEZ M. TERESA
Año: 2002
Universidad: VALENCIA
Centro de realización: FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Centro de lectura: BIOLOGÍA
Director: PÉREZ PAYÁ ENRIQUE
Tribunal: ABAD MANZARINO CONCEPCIÓN , CELDA MUÑOZ BERNARDO , NICOLAS GALINDO ERNESTO , JIMENEZ LÓPEZ M. ANGELES , FERRER MONTIEL ANTONIO
Resumen de la tesis

Se han diseñado dos peptidotecas conformiacionalmente definidas (PCD): la primera de ellas en hélice alfa y la segunda en horquilla beta. La deconvolución estructural de la PCD en hélice alfa, ha proporcionado un conjunto de 12 péptidos con estructura helicoidal. Estos péptidos ha sido utilizados como sistemas modelo para determinar la contribución de las interacciones de los residuos ubicados en posiciones i, i+3, así como los aminoácidos que participan en las interacciones intermoleculares dando lugar a la formación de agregados. Además, a partir de las 160.000 moléculas que componen la PCD se ha obtenido, al menos, un péptido que presenta estructura en hélice alfa a concentraciones de 1 mM, siendo monomérico en condiciones fisiológicas. La deconvolución estructural de la PCD en horquilla beta ha generado una colección de 36 péptidos (MBH) de secuencia definida. La caracterización estructural de estos péptidos se ha realizado mediante dicroismo circular y RMN. Los estudios estructurales de los mismos ha puesto de manifiesto que todos ellos presentan estructura en horquilla beta y a partir de estos se ha determinado la contribución a nivel de los aminoácidos que más contribuyen en la estabilización de esta estructura. De este grupo cabe destacar dos péptidos (MBH#12 y MBH#36) que presentan porcentajes de estructuras superiores al 65% de estructura en disolución acuosa. Finalmente, se evaluó la actividad biológica de la PCD en hélice alfa. Estas peptidoteca fue ensayada con el objetivo de inhibir parcialmente la formación de complejo SNARE. Dicho complejo se halla implicado en la fusión de la membrana de la vesícula sináptica con la membrana presináptica, siendo necesaria su presencia en la transmisión del impulso nervioso. La hiperactivación de este proceso es la causa de diversas sintomatologias tales como las distonias, el beflaroplato y el estrabismo entre otros. Así pues, se decidió utilizar una de las PCD con el objetivo de obtener péptidos que pudieran ser un tratamiento paulativo de estas sintomatologias. Debido a la estructura que presenta el complejo SNARE la PCD seleccionada fue la PCD en hélice alfa. A partir del cribado de esta peptidoreca se obtuvo una colección de 8 péptidos los cuales presentaron todos capacidad, aunque en diferente grado, de inhibir la formación del complejo SNARE, destacando los péptidos IFS#3 e IFS#4. En la actualidad, la actividad biológica in vivo de estos péptidos esta siendo evaluada. Los datos obtenidos ponen de manifiesto la uitlidad de la PCD como una doble herramienta de diseño, dado que a partir de una misma peptidoteca se pueden obtener, mediante deconvolución estructural, sistemas modelo sobre los que estudiar los factores que participan en el plegamiento de la estructura, así como mediante el ensayo biológico adecuado se pueden obtener péptidos bioactivos.
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