CULTIVO DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C EN HEPATOCITOS PRIMARIOS DE TUPAIA: CARACTERIZACIÓN VIRAL, CELULAR Y ESTUDIO DEL SISTEMA DEL INTERFERÓN TIPO I

Autor: GUITART LORENTE DE NO ANUNCIATA
Año: 2003
Universidad: NAVARRA
Centro de realización: FACULTAD DE FARMACIA
Centro de lectura: FARMACIA
Director: RIEZU-BOJ JOSÉ IGNACIO
Tribunal: CIVEIRA MURILLO MARÍA PILAR , SALMERÓN ESCOBAR FRANCISCO JAVIER , ESTEBAN RODRÍGUEZ MARIANO , RONCERO ROMERO CESÁREO , GONZÁLES ASEGUINOLAZA GLORIA
Resumen de la tesis

El Virus de la Hepatitis C (VHC) es un agente hepatotropo de transmisión parenteral que afecta al 2% de la población occidental y que cronifica en más del 80% de los infectados. No existe vacuna frente al VHC y el tratamiento actual sólo es eficaz en el 55% de los enfermos crónicos. El VHC es un virus humano y hasta el momento el único animal susceptible ha sido el chimpacé, pero su disponibilidad es muy limitada. Se han desarrollado diversos sistemas de cultivo celular para propagar el VHC pero en general sufren de pobre reproducibilidad y de baja replicación. Para caracterizar la biología del VHC, profundizar en la patogenia de la enfermedad y desarrollar nuevas estrategias antiviriales es necesario un nuevo modelo animal para realizar estudios tanto in vitro como in vivo. Tupaia belangeri es un pequeño mamífero asiático filogenéticamente relacionado con los primates, que ha demostrado ser parcialmente susceptible a la infección por el VHC tras inmunosupresión y posterior inoculación intravenosa de sueros infecciosos. El interferón (IFN) tipo I es una familia de proteínas que interviene como primera línea de defensa frente a una infección viral, pero parece que el VHC cuenta con diversos mecanismos para evadir el sistema del IFN. Puesto que los hepatocitos primarios de tupaia podrían ser una buena herramienta para estudiar la biología del VHC y la implicación del sistema del IFN tipo I en los mecanismos de la infección, se aislaron los hepatocitos de tupaia mediante tratamiento con colagenasa y se caracterizó el grado de diferenciación de las células al mantenerlas en cultivo durante largos periodos de tiempo en diferentes medios. Los hepatocitos primarios de tupaia se inocularon con sueros de pacientes con hepatitis C y se confirmó la infección y replicación del virus en las células utilizando varios maracadores virales: el RNA genómico del virus es detectable hasta 13 días post-inoculación, el intermediario de replicación (hebra negativa) está presente transitoriamente en la mayoría de los cultivos, y existe una evolución filogenética de las cuasiespecies del virus para adaptarse los hepatocitos de tupaia. Los hepatocios de tupaia altamente direrenciados son más permisivos a lainfección por VHC. Estudiando la familia del IFN tipo I de tupaia hemos observado que ésta está formada por, al menos, 3 pseudogenes de IFN-alfa, 1 gen de IFN-beta, 3 genes de IFN-*, 6 genes o pseudogenes de IFN-*, y 1 gen funcional al que hemos denominado IFN-P11 por agruparse junto a un pesudogen de IFN tipo I únicamente descrito en humanos (FNP11), que probablemente ejerza las funciones del IFN-alfa en el tupaia. El VHC es capaz de inducir la expresión de los IFNs beta y P11, y de varios genes inducibles por IFN tipo I en los hepatocitos primarios de tupaia infectados, así como de provocar la activación y translocación al núcleo del NF-kB. La susceptibilidad de los hepatocitos primarios de tupaia a la infección por el VHC está favorecida cuando el sistema del IFN tipo I se encuentra poco inducido.
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