CONTROL FISIOLÓGICO DE LA RUTA DE DEGRADACIÓN DE ALCANOS DEL PLASMIDO OCT DE PSEUDOMONAS PUTIDA GPO1

Autor: DINAMARCA TAPIA MIGUEL ALEJANDRO
Año: 2002
Universidad: AUTONOMA DE MADRID
Centro de realización: CENTRO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA
Centro de lectura: CIENCIAS
Director: ROJO DE CASTRO FERNANDO
Tribunal: LORENZO VICTOR DE , BERENGUER JOSÉ , PEDRO MIGUEL ANGEL DE , RAMOS JUAN LUIS , PUGET ANTONIO
Resumen de la tesis

La ruta de degradación de alcanos del plásmido OCT de Psudomonas putida GPo1, se encuentra regulado por un mecanismos específico de regulación conocido como "retroalimentación positiva". Además de este mecanismos se ha visto que la ruta esta sujeta a un control fisiológico o de represión catabólica. Para estudiar el mecanismo de regulación global, se diseñó un sistema para buscar cepas mutantes carentes de este control. Para esto se utilizó un sistema de mutagénesis con elementos transponibles, miniTn 5. Como resultado de la búsqueda de identificaron estirpes mutantes libres de este mecanismo de regulación y que expresan en diferentes condiciones la ruta de degradación de alcanos. La identificación de los genes interrumpidos mostró que estos codificaban para una oxidasa terminal llamada ubiquinol citocromo-oxidasa o. Este complejo enzimático forma parte de la cadena de transporte de electrones y como resultado de este trabajo se determinó que su expresión esta relacionada con los niveles de oxígeno y el tipo de fuente de carbono que Pseudomonas putida utiliza. Para estudiar en condiciones fisiológicamente estables la expresión de la ruta de degradación de alcanos de Pseudomonas putida, se utilizó el cultivo continuo. Como resultado de esta experiencia se observó que el succinato la represión catabólica por succinato es un importante mecanismo de regulación de la ruta de degradación de alcanos, no obsatente los resultados obtenidos indican que existen otrol mecanismos asociados con la mutación del complejo Cyo. Para conocer las señales ambientales que afectan la actividad del complejo Cyo, se cultivó a las células en condiciones de carencia de oxígeno en cultivos continuos limitados en succinato. Los resultados obtenidos indican que una carencia de oxígeno activa la expresión de la ruta alk. Como concluimos del trabajo se indica que la regulación de la ruta de degradación de alcanos esta controlada por un mecanismo fisiológico asociado a la actividad de la cadena de transporte de electrones. Dado que la actividad de la cadena de transporte de electrones es el reflejo del estado metabólico y fisiológico de la bacteria, se establece que la ruta de degradación de alcanos en Pseudomonas putida GPo1 esta acoplada a su fisiología.
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