CARACTERIZACIÓN ESTRUCTURAL DE PÉPTIDOS DE LOS DOMINIOS TERMINALES DE LA ISTONA H1

Autor: VILA UJALDÓN ROGER
Año: 2000
Universidad: AUTONOMA DE BARCELONA
Centro de realización: ESCUELA DE DOCTORADO Y DE FORMACIÓN CONTINUADA
Centro de lectura: CIENCIAS
Director: SUAU LEÓN PERE
Tribunal: MEZQUITA PLÁ CRISTÓBAL , CORNUDELLA MIR LLUÍS , DABAN ALAÑA JOAN RAMÓN , ROCA BOSCH JOAQUIM , FARRÉS VICÉN JAUME
Resumen de la tesis

La histona H1 es la proteína responsable de la formación de la superestructura de la cromatina. Esta proteína está formada por tres dominios: una región globular central flanquedad por colas N- y C-terminales hidrofilicas y básicas, muy ricas en lisina, alanina y prolina. Mediante técnicas de dicroísmo circular DC, resonancia magnética nuclear de protón de doble dimensión RMN-2D y espectroscopia de infrarrojo FTIR, se ha estudiado al estructura de péptidos de los dominios N- y C-terminales de los subtipos H1º y H1e, en distintas condiciones: en disolución auosa, en presencia de 2,2,2,-trifluoroetanol TFE y en presencia de DNA. Los péptidos estudiados son; NH1m de 20 residuos, que corresponde a todo el dominio N-terminal de la H1º, idéntico en ratón y humano, y NH2 correspondiente a los residuos 8-30 de la misma proteína. CH1 corresponde a los residuos 99-121, incluidos en el dominio C-terminal de la H1º, idénticos en ratón y rata. NE-1 corresponde a los residuos 15-36 del dominio N-terminal de la H1e de ratón. Los estudios de DC y RMN-2D de protón revelan que ninguno de los péptidos de la histona H1 estudiados se encuentra estructurado de forma estable en disolución auosa. En 90% de TFE, en cambio, los cuatro péptidos adquieren un porcentaje subsatancial de estructura secundaria, especialmente hélice alfa. Concretamente, NE-1 se estructura en dos hélices alfa anfipáticas separadas por dos glicinas. Este doblete de glicinas define uan zona flexible que provoca libertad de movimientos de las dos hélices. El dominio N-terminal de la H1º, según se desprende de nuestros resultados con NH-1 t -NH-2, carece de estructura en su mitad N-terminal y del residuo 11 a 23 se estructura en una hélice alfa. CH-1 se estructura en una hélice alfa anfipática del residuo 100 a 116. Sin embargo,parece que los primeros 4 residuos forman una hélice 3 10. El motivo TPKK de su extremo C-terminal se estructura en un giro beta/-. Se han estudiado los péptidos NH-1, NH-2 y CH-1 por FTIR. En disolución acusosa,la amida I de los tres péptidos presenta un componente principal a 1641 cm-1, característico del ovillo estadístico. En 90% de TFE, aparecen hélices y giros en proporciones que se ajustan a los resultados de RMN. También hemos estudiado la estructura de los péptidos unidos a DNA genómico de raón y a DNAs repetitivos como poli (dA-dT) pli (dA-dT). No se observan diferencias importantes entre los diferentes DNAs. Al interaccionar con el DNA, los péptidos se estrcutran en hélice alfa con unos porcentajes muy parecidos a los observados en TFE. Para CHE-1, los componentes atribuidos al giro beta/- y a hélices 3 10 también aparecen en los espectros de los complejos con DNA. En conclusión, el DNA induce estructura secundaria en regiones de los dominios N- y C-terminales de la histona H1, concretamente hélices alfa, hélices 3 10 y giros. El TFE revela dicha estructura y permtie su estudio a alta resolución.
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