AISLAMIENTO PURIFICACION Y CARACTERIZACION MOLECULAR Y CINETICA DE LA ENZIMA GLUTATION REDUCTASA DE HIGADO DE CABALLO.

Autor: GARCIA ALFONSO M. CONCEPCION
Año: 1986
Universidad: CORDOBA
Centro de realización: DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR. UNIDAD DE VETERINARIA. UNIVERSIDAD DE CORDOBA
Centro de lectura: VETERINARIA
Director:
Tribunal: LOPEZ BAREA JUAN , SOLER GRAU GERMAN , PINTO CORRALIZA MA DEL CARMEN , LOPEZ PEREZ MANUEL , DIEZ DAPENA JESUS
Resumen de la tesis

LA GLUTATION REDUCTASA DE HIGADO DE CABALLO HA SIDO PURIFICADA A HOMOGENEIDAD EN UN PROCESO BASADO FUNDAMENTALMENTE EN CROMATOGRAFIAS DE AFINIDAD. EL RENDIMIENTO DEL PROCESO FUE DEL 47% OBTENIENDOSE UNA ENZIMA CON 246 U/MG DE PROTEINA TRAS UNA PURIFICACION DE 11.174 VECES. LA GLUTATION EDUCTASA DE HIGADO DE CABALLO PRESENTA UN ESPECTRO TIPICO DE FLAVOPROTEINA HABIENDOSE CALCULADO UN PESO MOLECULAR DE 107.100 DALTONS Y UN COEFICIENTE DE FRICCION DE 1 315. LA ENZIMA PRESENTA UNA KM APARENTE DE 8 88 UM PARA EL NADPH Y DE 683 UM PARA EL NADH SIENDO MUCHO MAS EFECTIVO EL PRIMERO DE ELLOS COMO DONADOR DE ELECTRONES RESULTANDO TAMBIEN MUY EFICIENTE EL DEAMINO-NADPH. LA ENZIMA ES MUY ESPECIFICA PARA EL GSSG COMO ACEPTOR DE ELECTRONES CON UNA K'M = 59 UM. LA ACTIVIDAD DIAFORASA DE LA GLUTATION REDUCTASA HA SIDO DETERMINADA CON DPIP Y FERRICIANURO COMO ACEPTORES DE ELECTRONES SUPONIENDO UN 1 3% DE LA ACTIVIDAD CON GSSG. LA ENZIMA DE HIGADO DE CABALLO SE INACTIVA POR INCUBACION EN PRESENCIA DE COMPUESTOS REDUCTORES EN UN PROCESO DEPENDIENTE DEL TIEMPO Y DE LA TEMPERATURA. LA ENZIMA ES MAS SENSIBLE AL TRATAMIENTO CON NADH QUE FRENTE AL NADPH. LA INACTIVACION DE LA ENZIMA SE PROTEGE POR COMPUESTOS CAPACES DE OXIDAR A LA ENZIMA COMO FERRICIANURO Y GSSG POR LOS PIRIDIN NUCLEOTIDOS OXIDADOS Y POR LOSCOMPUESTOS TIOLICOS COMO GSH Y DTT. EL GSH ADEMAS ES CAPAZ DE INACTIVAR POR SI SOLO A LA ENZIMA EN UN PROCESO QUE SE PROTEGE POR GSSG. EL EDTA PROTEGE MUY EFECTIVAMENTE A LA ENZIMA DE LA INACTIVACION POR NADPH. LA GLUTATION REDUCTASA DE HIGADO DE CABALLO INACTIVADA RECUPERA SU ACTIVIDAD POR TRATAMIENTO CON COMPUESTOS CAPACES DE OXIDAR A LA ENZIMA Y POR TIOLES MEDIANTE DOS PROCESOS CINETICAMENTE DISTINTOS PARA LOS QUE NO SE REQUIERE LA PRESENCIA DE CATIONES METALICOS LIBRES.
Materias relacionadas